Recetas de Agar y Vertido

La receta estándar de agar con extracto de malta claro (LME): 500ml de agua + 10g de extracto de malta claro + 10g de polvo de agar (una concentración del 2% para ambos componentes). Mezcla en un matraz o botella de vidrio, cubre holgadamente con papel aluminio, y esteriliza a 15 PSI durante 20-30 minutos.

Después de la esterilización, deja que el medio se enfríe a aproximadamente 55°C (suficientemente frío para sostener el recipiente cómodamente pero aún líquido), luego vierte en placas de Petri frente a tu campana de flujo o dentro de tu SAB.

Detalles del vertido:

• Cada lote de 500ml rinde aproximadamente 20 placas estándar de 90mm
• Vierte aproximadamente 20-25ml por placa
• Llena hasta que el agar cubra el fondo de la placa a una profundidad de aproximadamente 3-4mm

El PDA es el medio de agar de laboratorio estándar utilizado en micología profesional. El PDA proporciona un perfil nutricional más rico que el agar LME y es preferido para aislar especies de crecimiento lento.

Receta desde cero:

• Hierve 200g de papas cortadas en cubos en 1 litro de agua durante 20 minutos
• Cuela los trozos de papa
• Agrega 20g de dextrosa (glucosa) y 20g de polvo de agar al caldo de papa
• Vuelve a hervir a fuego lento mientras revuelves hasta que el agar se disuelva
• Esteriliza a 15 PSI durante 20 minutos

Alternativamente, compra polvo de PDA premezclado — solo agrega agua según las instrucciones del paquete. Para la mayoría de los cultivadores caseros, el agar LME es más simple y funciona igual de bien para las especies gourmet comunes.

Mezcla tu receta de agar en una botella de vidrio resistente al calor o matraz Erlenmeyer. Cubre la abertura holgadamente con papel aluminio — no apretado, ya que la presión necesita equilibrarse durante la esterilización. Coloca en tu olla a presión sobre un soporte o rejilla (no directamente en el fondo).

Esteriliza a 15 PSI durante 20-30 minutos. Más tiempo no hará daño pero puede caramelizar ligeramente los azúcares, tornando el medio amarillo-marrón (aún funcional).

Después de que la presión baje naturalmente, retira la botella con cuidado — está muy caliente. Deja enfriar a aproximadamente 55°C antes de verter. Si esterilizas en lotes, puedes mantener la botella en un baño de agua tibia alrededor de 55-60°C para evitar la solidificación prematura mientras viertes las placas.

Vierte el agar a aproximadamente 55°C (131°F). A esta temperatura, el agar aún es lo suficientemente líquido para fluir suavemente pero lo bastante frío para no crear condensación excesiva en las tapas de las placas.

Una prueba práctica: si puedes sostener el recipiente en tu mano desnuda sin que sea dolorosamente caliente, está aproximadamente a la temperatura correcta.

Problemas comunes:

• Demasiado caliente (por encima de 60°C) — crea condensación pesada que gotea sobre la superficie del agar, promoviendo el crecimiento bacteriano
• Demasiado frío (por debajo de 50°C) — el agar comienza a solidificarse en el recipiente, volviéndose grumoso y difícil de verter uniformemente

Si tu agar comienza a gelificar, puedes refundirlo en un microondas o baño de agua caliente — puede refundirse múltiples veces sin perder calidad.

Trabaja frente a una campana de flujo laminar o dentro de una SAB. Pasa la abertura de tu botella de agar por la llama antes de verter. Abre la tapa de cada placa de Petri solo lo suficiente para verter — nunca retires la tapa completamente.

El proceso de vertido:

• Vierte rápida y suavemente, llenando la placa a una profundidad de aproximadamente 3-4mm (aproximadamente 20-25ml para una placa de 90mm)
• Reemplaza la tapa inmediatamente
• Apila las placas vertidas boca abajo (agar arriba, tapa abajo) — esto evita que la condensación gotee sobre la superficie del agar
• Deja que las placas se solidifiquen a temperatura ambiente durante 30-60 minutos
• Almacena en una bolsa o contenedor limpio y sellado

Verter 20 placas debería tomar menos de 10 minutos una vez que tengas el ritmo.

Las Primo Plates son placas de Petri reutilizables de plástico transparente con tapas a presión, diseñadas específicamente para micología. A diferencia de las placas de Petri desechables estándar, las Primo Plates pueden lavarse, esterilizarse y reutilizarse cientos de veces. Están hechas de polipropileno, que puede soportar las temperaturas de la olla a presión.

La técnica de preparación y vertido: apila las Primo Plates limpias, envuélvelas en papel aluminio, esteriliza en la olla a presión, luego vierte agar directamente en las placas esterilizadas dentro de tu SAB o campana de flujo.

Beneficios sobre las placas desechables:

• Ahorro de costos con el tiempo (la inversión inicial se recupera después de 3-4 lotes)
• Mejor sellado (las tapas a presión son más seguras que el ajuste por fricción de las placas de Petri estándar)
• Menos residuos plásticos

Disponibles en proveedores especializados de micología.

Almacena las placas vertidas boca abajo (agar arriba) en bolsas de plástico selladas o contenedores en un refrigerador a 2-8°C. La orientación boca abajo evita que la condensación se acumule en la superficie del agar.

Consejos de almacenamiento:

• Envuelve pilas de 5-10 placas en parafilm o colócalas dentro de bolsas de cierre hermético de un galón
• Almacenadas de esta manera, las placas vertidas permanecen viables durante 2-4 semanas
• Si notas condensación excesiva formándose, tu refrigerador puede estar demasiado frío o tener mal control de humedad
• Nunca congeles placas vertidas — el agar se agrietará y quedará inutilizable

Etiqueta cada lote con el tipo de receta y la fecha de vertido usando un marcador en el borde de la placa.

Las placas de agar vertidas correctamente almacenadas duran 2-4 semanas en el refrigerador. Después de aproximadamente 3 semanas, el agar comienza a secarse desde los bordes, separándose de las paredes de la placa, lo que compromete la esterilidad.

Señales de que una placa ha pasado su mejor momento:

• Secado visible o agrietamiento alrededor de los bordes
• El agar se ha separado de la pared de la placa
• Cualquier contaminación creciendo a pesar de no haber sido inoculada

Para almacenamiento más prolongado, envuelve placas individuales firmemente con parafilm (película de cera elástica) alrededor de toda la junta entre tapa y base. Las placas envueltas con parafilm pueden durar 6-8 semanas refrigeradas. Algunos cultivadores vierten en lotes más pequeños con mayor frecuencia en lugar de almacenar grandes cantidades.

Las placas de agar contaminadas muestran patrones de crecimiento distintos del micelio. La contaminación bacteriana aparece como estrías o colonias húmedas, brillantes y mucoides — a menudo blancas, amarillas o anaranjadas — que se extienden por la superficie en patrones irregulares. La contaminación por moho (Trichoderma, Penicillium, Aspergillus) comienza como un pequeño punto que se expande rápidamente en un círculo de color con textura polvorienta o peluda.

Diferencias clave con el micelio:

• Los contaminantes a menudo crecen más rápido que el micelio
• Aparecen como puntos distintos en lugar de irradiar desde el punto de inoculación
• Tienen colores distintos al blanco (verde, azul-verdoso, negro, anaranjado, amarillo)

Si la contaminación aparece en una placa inoculada, a menudo puedes rescatar el cultivo cortando un pequeño trozo de micelio limpio del borde de avance y transfiriéndolo a una placa fresca.

El agar sin vertido es una técnica donde preparas y esterilizas el medio de agar directamente dentro de recipientes pequeños (como mason jars de 120ml, vasos de condimento o vasos de deli pequeños) en lugar de verter desde una botella en placas de Petri. Agrega tu receta de agar a cada recipiente, cubre con papel aluminio y cocina todo a presión. Después de la esterilización, el agar solidifica en su lugar — no se necesita paso de vertido.

Ventajas:

• Elimina completamente el paso de vertido propenso a contaminación
• Los recipientes tienen sellos más ajustados que las placas de Petri
• Los frascos pequeños son más baratos que las placas desechables

Desventajas:

• Más difícil ver el cultivo claramente a través de las paredes del frasco
• Las transferencias son más difíciles
• No puedes quitar la tapa tan fácilmente como en una placa de Petri

Mejor para principiantes o cultivadores sin campana de flujo que quieren minimizar el riesgo de contaminación durante la preparación de placas.

Antibióticos como el sulfato de gentamicina se agregan al agar para suprimir la contaminación bacteriana mientras permiten que el micelio crezca. La adición estándar es 200-500 mg/L de gentamicina, agregada al medio de agar después de que se enfríe a aproximadamente 55°C (el calor destruye el antibiótico). Nunca agregues antibióticos al medio por encima de 60°C.

Usa agar con antibiótico cuando:

• Estés trabajando con clones de tejido de hongos silvestres o comprados en tienda (que portan bacterias superficiales)
• Estés germinando esporas que puedan portar bacterias acompañantes
• Estés intentando rescatar un cultivo con contaminación bacteriana pero no fúngica

El agar con antibiótico es una herramienta, no un sustituto de la técnica estéril — si tus placas limpias están obteniendo contaminación bacteriana consistentemente, corrige tu técnica en lugar de depender de antibióticos.